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那么硬骨素试剂盒在实验操作时需注意什么?

2021-03-18 浏览次数:289

   硬骨素试剂盒——骨转换的检测标识骨重建是骨吸收和更新的生命协调过程,它在重建骨骼的同时维持其骨架。成骨细胞和破骨细胞是专门负责这个过程的细胞。近年来,检测和塑造参与骨代谢调控通路的分子,已取得重大进展。这些发现反过来又促进了反映骨形成或骨吸收的新的生化标识物的发展。这些标识物有利于骨代谢疾病和骨质疏松症、风湿性关节炎、转移性骨骼疾病药物发展的病理生理过程的调查。}
  那么硬骨素试剂盒实验操作时需注意什么:
  1、标准品的稀释与加样
  2、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
  4、配液:将30(48t的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48t的20倍)倍稀释后备用。
  5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
  7、温育:操作同3。
  8、洗涤:操作同5。
  9、显色:每孔先加入显色剂a50μl,再加入显色剂b50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
  10、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  11、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(od值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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